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實驗室層析技術操作原理、步驟及適用范圍

 更新時間:2015-01-28    點擊量:2948
 一、實驗室層析技術儀器設備
 
紫外檢測儀、蠕動泵、記錄儀、ATK層析系統、層析柜、樹脂、樣品等。
 
二、實驗室層析技術原理
 
由于填料的不同,各個實驗室所使用的層析技術的原理也不*相同。但不外乎以下幾種基本原理:分子篩作用、離子交換作用、親和層析作用等等。分子篩作用是由于填料上有一定規格的孔徑,分子量大小不一樣的樣品流過柱子時所受到的作用力不一樣,所走的路徑也不同,所以流出柱子的時間也就有了差異,不同組分得以分開。離子交換是由于正負電荷的吸引而使樣品掛在填料上,改變溶液環境,使樣品分子所帶的電荷產生變化,從而被洗脫下來,不同組分與柱料的吸附作用力時不同的,從而洗脫條件也是不同的。親和層析就是柱料與被分離樣品特異性的吸附結合一起,從而使被分離物質與其他成份分離開來。
 
三、實驗室層析技術適用范圍
 
1、蛋白質分子量的測定
 
2、蛋白質的分離純化
 
3、多糖的分子量測定
 
4、多糖的分離純化
 
四、實驗室層析技術操作步驟
 
1、柱料的前處理
 
2、選擇合適直徑與長度的層析柱,裝柱
 
3、裝完柱之后就連上紫外檢測器,檢驗260nm處的吸光值
 
4、用上樣緩沖液平衡柱子
 
5、將樣品液濃縮后上樣
 
6、洗脫液洗脫,部分收集器收集各個組分
 
7、分別測定各個組分的濃度和含量;合并活力峰
 
五、實驗室層析技術注意事項
 
1、柱料前處理一定要*,*,將雜質全部除去。
 
2、上樣之前柱子平衡要過夜。
 
3、分子篩層析時點樣量不能過大,柱面一定要平。
 
4、上樣、洗脫時一定要對目標產物跟蹤去向。
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